クロストークまたは表面滲み
(Crosstalk or bleedthrough)
蛍光顕微鏡では、マルチチャネル画像を取得するときにクロストーク（または表面滲み）が発生することがあります。 その場合、フォトンの一部が顕微鏡内の間違った光路を通過するため（例えば、フィルターの効率が 100 % ではないため）、特定の蛍光波長の蛍光放射が間違った検出器によって検出されます。 その結果、あるシグナルは、実際には別の色素からのものであるにもかかわらず、実際には、特定の色素からのものとして記録されます。
上のアニメーションは、2 チャネル画像で緑色の検出器に入る赤色シグナルを示しています。 サンプル は、赤色と緑色に染色された 2 つの重なり合わない対象物で構成されています。 クロストーク係数が 高いほど、赤色の対象物は、より黄色く見えます。 これは、シグナルが赤色のチャネルだけでなく緑 色のチャネルにも記録されるためです。 緑色から赤色のチャネルへのクロストークは、この単純化され たケースでは、ゼロと見なされます。
クロストークを避けるために、顕微鏡は、通常、各色素を交互に励起し、検出されたすべての蛍光が単 一の色素タイプから来るようにします。 ただし、一部の実験（蛍光共鳴エネルギー移動 - FRET など） では、存在するすべての色素からのシグナルを同時に取得する必要があり、クロストークのリスクが生 じる可能性があります。 マルチチャネル画像のクロストークは、コロカリゼーション解析など、ほぼす べてのタイプのデータ解析に劇的に影響します。 したがって、画像復元によって補正する必要がありま す。
顕微鏡画像の品質を向上させ、信頼性の高い画像解析を可能にするために、Huygens は、この画像アー チファクトを補正するためのクロストーク補正ツールを提供しています。
クロストークを評価する前（左図）と後（右図）の Huygens Crosstalk Corrector のメインウィンドウ。